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Bst DNA聚合酶是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分，具有很强的链置换活性，以及5'→3'的DNA聚合酶活性，因此可以应用于LAMP检测实验。

LAMP是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖与Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30～60分钟内DNA扩增可达10⁹～10¹⁰倍。

在LAMP的高效反应过程中会产生大量的焦磷酸根离子，其与镁离子结合形成焦磷酸镁白色沉淀，因此在实验过程中可通过检测反应液的浊度变化进行实时定量检测。也可在反应结束后肉眼直接观察焦磷酸镁沉淀，根据是否形成白色沉淀来判断反应是否发生。

• 为了减少交叉污染，请分区操作（试剂和模板DNA的配置操作最好在不同区域中进行）。
  
• 实验时，所需模板量取决与样品类型（0.1ng～100ng），可先进行预实验确定模板量。
  
• 各区物品均为专用，不可交叉使用，防止污染。
  
• 实验过程中应穿工作服，带手套，建议使用带滤芯的一次性吸嘴。

• 按下表加入各成分配制LAMP反应体系：
  

  成分	用量
  2×Turbidity LAMP Mix	12.5μL
  10×LAMP Primer Mix	2.5μL
  5M Betain	0～4μL
  模板DNA	X μl
  Bst2.0 DNA Polymerase	1μL
  ddH2O	至25μL

• 反应体系配好后，充分混匀并短暂离心，置于60～68℃进行反应，连接LAMP实时浊度仪，对浊度变化进行实时检测。也可肉眼分别于30min、45min、60min观察浊度变化。必要情况下85℃热失活5min（可选）。
  

• 10×LAMP Primer Mix配制：
  

  引物	浓度	首次实验浓度	引物储液浓度
  FIP/BIP	8～16μM	8,12,16μM	100μM
  Loop F/Loop R	2～8μM	2,4,8μM
  F3/B3	0.5～2μM	0.5,1,2μM

• Betain使用浓度：
  

  测试浓度	5M Betain 25μL体系添加量
  0M	0μL
  0.25M	1.25μL
  0.4M	2μL
  0.6M	3μL
  0.8M	4μL

• Turbidity LAMP对照设置：
  

  	浊度对照	阴性对照	实验样品
  ddH2O	√	√	√
  Turbidity LAMP Mix	√	√	√
  LAMP Primer Mix	√	√	√
  5M Betain	可选	可选	可选
  模板DNA	√	×	√
  Bst2.0	×	√	√

• 反应温度设置：
  通常反应温度为65℃，由于引物的效率差异，可在60、63、65、68℃进行适当调整。首次实验建议采用60、65℃。